Питательные среды.

В ростовые питательные среды, а так же в буферный раствор для промывания тканей добавляют антибиотики. Их вводят в среду непосредственно перед употреблением из расчета 1 мл основного раствора антибиотиков на 500 мл среды.

Ниже приведен состав и метод приготовления одной из распространенных питательных сред.

Среда Игла

1. л-аргинина - 17,4

2. л-цистина - 4,8

3. л-гистидина - 3,1

4. л-изолейцина - 26,2

5. л-лейцииа - 13,1

6. л-лизина - 14,6

7. л-метионина - 7,5

8. л-фенилаланина - 8,3

9. л-треонина - 11,9

10. л-триптафана - 2,0

11. л-тирозина - 18,1

12. л-валина - 11,7

13. биотина - 0,24

14. холина - 0,12

15. холин-хлорида - 0,14

16. витамина В12 (птероилглютаминовой кислоты) - 0,44

17. никотинамида - 0,12

18. пантотеновой кислоты - 0,22

19. пантотената кальция - 0,48

20. пиридоксаля (пиридоксин хлоргидрата) - 0,20

21. тиамин-хлоргидрата - 0,34

22. рибофлавина - 0,04

23. хлористого натрия - 5850,0

24. хлористого калия - 373,0

25. фосфата натрия однозамещенного (NaH2PO4 . Н2О) - 138,0

26. кальция хлористого - 111,0

27. двууглекислого натрия (NaHCO3) - 1680,0

28. магния хлористого (MgCl2 . 6Н2О) - 102,0

29. глюкозы - 900,0

30. л-глютамина - 146,2—292,3

31. пенициллина - 50,0

32. стрептомицина - 50,0

33. фенола красного - 5,0

34. воды до 1000,0

Приготовление.

Раствор 1. В 500 мл воды, нагретой приблизительно до 80°, помешивая, растворяют указанные выше количества аминокислот, после чего добавляют л-глютамин и фенол-красный.

Раствор 2. В 100,0 мл воды растворяют неорганические соли, за исключением дву­углекислого натрия (NaHCO3), смешивают с предыдущим раствором неорганических солей и добавляют биотин и витамин B12.

Раствор 3. В 200,0 мл воды растворяют все витамины, кроме биотина и птеро-илглютаминовой кислоты, и антибиотики — пенициллин и стрептомицин. Все растворы стерилизуют фильтрованием через стеклянный фильтр-нутч (пори­стая стеклянная пластина, величина пор 0,7—1,5 ) либо через асбестоцеллюлозные пластины Зейтца после предваритель­ного промывания водой, а затем — приготовленным раствором.

500 мл раствора 1 + 200 мл раствора 2 + 200 мл раствора 3 смешивают и доводят стерильной водой до 1000,0 мл. Можно добавить 1 мг инозита на 1 л.

ПОЛУЧЕНИЕ КЛЕТОЧНЫХ КУЛЬТУР.